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项目介绍

生物学活性检测

抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity, ADCC ),是指抗体的Fab端与靶细胞上的抗原结合,其Fc段与杀伤细胞(如NK细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等)表面的Fcγ受体结合,触发效应细胞的杀伤活性,进而达到杀伤靶细胞的目的。       

实验原理:以ADCC作用机制为原理,选择高表达特定抗原的靶细胞,合适的细胞作为效应细胞,将不同浓度的抗体Fab端与靶细胞结合,其Fc段与效应细胞结合后,效应细胞表面的信号通路激活,通过检测相应物质信号的强度,并计算供试品的半数有效浓度,进而评价蛋白药物的ADCC效应。

服务项目

服务内容

  • 实验原理

    表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)是当入射光以临界角入射到两种不同折射率的介质界面(比如玻璃表面的金或银镀层)时,可引起金属自由电子的共振,由于共振致使电子吸收了光能量,从而使反射光在一定角度内大大减弱。其中,使反射光在一定角度内完全消失的入射角称为SPR角。SPR随表面折射率的变化而变化,而折射率的变化又和结合在金属表面的生物分子质量成正比。因此可以通过获取生物反应过程中SPR角的动态变化,得到生物分子之间相互作用的特异性信号。

     

  • 实验步骤

    将CM5芯片进行活化、固定、封闭。参比通道(FC3)与试验通道(FC4)进行相同的操作,将稀释后的蛋白依次以恒定的流速注入到实验通道与参比通道,结合时间为60 s,解离时间为120 s。结合解离步骤均在运行试剂中进行。每一个浓度分析后,芯片需要用3 M 氯化镁以恒定流速再生掉配体以及未解离的分析物。进行下一个浓度分析时,实验通道需要重新捕获相同量的配体。所有的操作步骤均在运行试剂中进行,SPR的分析试剂均需过滤脱气使用。使用Biacore 分析软件计算每个抗体的亲和力常数KD值。参比通道(FC3)用于背景的扣减。

     

相关仪器及设备